細(xì)胞爬片就是讓細(xì)胞(貼壁細(xì)胞)在片子(蓋玻片)上生長。主要用來做免疫細(xì)胞化學(xué)啊,原位雜交等吧。在做這些實驗時,制作標(biāo)本有兩種,一是離心做細(xì)胞涂片,二是細(xì)胞爬片。利用貼壁細(xì)胞在玻璃等物質(zhì)上貼壁生長的特點,讓它在蓋玻片上生長,可以使制作的細(xì)胞片子更牢固,在后面的洗滌過程中,不易脫落。特別是在用粘附劑如多聚賴安酸處理過的片子上,細(xì)胞貼得更牢固。
細(xì)胞爬片的實驗步驟:
1、將蓋玻片用洗潔劑清洗干凈,然后用自來水將洗潔劑沖洗干凈,再用純水沖洗三遍,75%的酒精中靜置浸泡10min。
2、用鑷子夾起蓋玻片在酒精燈上將酒精燒干,溫度不可太高。
3、將燒干的蓋玻片放在六孔板中,待冷卻后在6孔板中先加入2ml培養(yǎng)基,后加入細(xì)胞懸液,輕輕上下左右晃動,后置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
實驗注意事項:
使用細(xì)胞爬片時,比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,加細(xì)胞懸液時常常就是細(xì)胞鋪滿整個孔底,有時細(xì)胞生長邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對較少。
比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,加細(xì)胞懸液時只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣(因為液體表面張力作用可以很容易做到這一點。),放在培養(yǎng)箱里,等細(xì)胞貼壁后,取出,再滴加培養(yǎng)基布滿整個孔底,繼續(xù)培養(yǎng),這樣玻片上的細(xì)胞生長的密度就會很集中。